学术论文

      基于超高效液相色谱-四极杆飞行时间高分辨质谱的高通量血清代谢组学方法

      Robust and High Throughput UPLC-QTOFMS Method for the Global Metabolic Profiling Study of Human Serum

      摘要:
      采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间高分辨质谱(UPLC-QTOFMS)联用技术,对血清前处理进行了考察和优化,并对液-质联用分析条件进行了优化,旨在建立用于血清中广谱小分子代谢物分析的高通量强耐用代谢组学方法,以期满足大批次生物样本数代谢组学研究的要求(样本数≥400个).通过考察不同有机溶剂沉淀蛋白对血清中蛋白的去除程度及38个代表性标准品化合物的提取效果,确定采用甲醇/乙腈(体积比1:9)沉淀蛋白法.血清和有机溶剂的体积比不小于1:4时,达到最佳的沉淀蛋白处理效果,符合大批量样本测试的要求;预先冷藏沉淀蛋白的有机溶剂,涡旋2 min,超声1 min,加入有机溶剂后冷冻静置10 min,可以进一步提高前处理沉淀蛋白和化合物提取的效果.通过对不同流动相体系和梯度条件的考察,对液-质联用分析条件进行了优化.方法学考察结果表明,本方法重现性、精密度及稳定性均良好.对重现性和48 h稳定性数据进行变异系数分析和主成分分析法的多维分析,证明本方法在代谢组学研究中的可重复性及所得数据的可靠性.本方法高通量强耐用,每天可测定100多个血清样本(13 min测定1个样本),适用于代谢组学研究,特别是大批次生物样本的代谢组学研究.
      作者: 成玉 [1] 刘玉敏 [2] 黄凤杰 [2] 陈天璐 [3] 郑晓皎 [2] 赵爱华 [2] 何品刚 [1] 贾伟 [4]
      Author: CHENG Yu [1] LIU Yu-Min [2] HUANG Feng-Jie [2] CHEN Tian-Lu [3] ZHENG Xiao-Jiao [2] ZHAO Ai-Hua [2] HE Pin-Gang [1] JIA Wei [4]
      作者单位: 华东师范大学化学系,上海,200062 上海交通大学药学院,上海,200240 上海交通大学附属第六人民医院,上海,200233 Department of Nutrition,University of North Carolina at Greensboro,Kannapolis 28081,USA
      刊 名: 高等学校化学学报 ISTICSCIPKU
      年,卷(期): 2013, 34(1)
      分类号: O657
      机标分类号: O65 TH8
      在线出版日期: 2013年3月28日
      基金项目: 国家"九七三"计划项目