学术论文

      多房棘球绦虫apomucin基因qPCR引物的筛选及潜在应用

      Screening and Applications of qPCR Primers for apomucin Gene of Echinococcus multilocularis

      摘要:
      目的 筛选多房棘球绦虫(Echinococcus multilocularis)apomucin基因(Em-apo)的qPCR最佳引物,探索该基因的表达水平. 方法 根据GeneDB中4种Em-apo序列,设计引物并通过荧光定量PCR (qPCR)对引物进行分析,确定每对引物的特异性、PCR扩增效率.利用筛选得到的最佳引物,分别检测经阿苯达唑(5 μg/ml)和胰岛素(100 ng/ml)培养处理的多房棘球绦虫原头节(1 000个)Em-apo表达水平的变化,用稀释阿苯达唑的DMSO和胰岛素的PBS作为各自的对照. 结果 筛选分别得到了Em-apo-1、Em-apo-2/3、Em-apo-4和内参基因actin的特异引物各1对,qPCR熔解曲线分析结果显示,每对引物的扩增产物只出现单峰,且扩增效率均为95%~101%.qPCR分析结果显示,与DMSO对照组(1.00)相比,多房棘球绦虫原头节经阿苯达唑处理后,Em-apo-1、Em-apo-2/3和Em-apo-4的表达水平均有所上升,分别为1.51±0.27、1.39±0.30和1.14±0.18,三者差异无统计学意义(P>0.05);与PBS对照组(1.00)相比,原头节经胰岛素处理后,Em-apo表达水平的变化不一,其中Em-apo-1的表达水平基本不变,Em-apo-4的表达水平有所下降,而Em-apo-2/3明显下调(0.73 ±0.09),但三者差异无统计学意义(P>0.05). 结论 本实验筛选确定的Em-apo基因的qPCR引物特异,可用于Em-apo基因表达水平的检测.多房棘球绦虫原头节经阿苯达唑和胰岛素处理后,对Em-apo-1、Em-apo-2/3和Em-apo-4的表达水平有一定的影响.
      作者: 苏梦 [1] 郭小腊 [2] 杨静 [2] 邵忠伟 [2] 丁军涛 [3] 项海涛 [4] 骆学农 [5] 郑亚东 [5] 孙晓林 [4]
      作者单位: 甘肃农业大学动物医学院,兰州730070;中国农业科学院兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室,甘肃动物寄生虫病重点实验室,兰州730046 中国农业科学院兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室,甘肃动物寄生虫病重点实验室,兰州730046 新疆大学生命科学与技术学院,乌鲁木齐,830046 甘肃农业大学动物医学院,兰州,730070 中国农业科学院兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室,甘肃动物寄生虫病重点实验室,兰州730046;江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心,扬州225009
      年,卷(期): 2016, 34(5)
      分类号: R383.33
      在线出版日期: 2016年12月20日